1.適用範圍：本檢驗方法適用於寵物食品中無機砷之檢驗。
2.檢驗方法：檢體經萃取及氧化後，以液相層析感應耦合電漿質譜儀 (liquid chromatograph/inductively coupled plasma mass spectrometer, LC/ICP-MS)分析之方法。
2.1裝置：
2.1.1 液相層析感應耦合電漿質譜儀：
2.1.1.1 層析管：PRP-X 100，5µm，內徑4.6mm × 15cm，或同級品。
2.1.2 酸蒸氣清洗裝置(Acid steam cleaning system)。
2.1.3 粉碎機(Mill)：不鏽鋼，附孔徑1 mm之篩網。
2.1.4 攪拌均質機(Blender)。
2.1.5 旋渦混合器(Vortex mixer)。
2.1.6 超音波振盪器(Ultrasonicator)：附有水浴槽自動溫度調節，溫度在± 4℃以內者。
2.1.7 離心機(Centrifuge)：可達3000 ×g以上。
2.1.8 酸鹼度測定儀(pH meter)。
2.2試藥：硝酸採用超純級(67-70%)及試藥特級；過氧化氫(30%)及冰醋酸採用超純級；甲醇及正己烷均採用液相層析級；碳酸銨採用試藥特級；去離子水(比電阻於25℃可達18 MΩ‧cm以上)；三價砷對照用標準品(1000 μg/mL)及五價砷對照用標準品(1000 μg/mL)(註)均採用ICP分析級。
註：本檢驗方法使用三價砷對照用標準品，經氧化成五價砷，以五價砷進行定量；五價砷對照標準品係作為層析對照用。
2.3 器具及材料：
2.3.1 離心管：50 mL，PP材質。
2.3.2 容量瓶(註)：20 mL、50 mL及100 mL。
2.3.3 濾膜：孔徑0.22 μm，PVDF材質。
註：器具經洗淨後，放入酸蒸氣清洗裝置，以硝酸(試藥特級)蒸氣酸洗2小時後，取出以去離子水將附著之硝酸沖洗乾淨，乾燥備用；或浸於硝酸(試藥特級)：水(1:1, v/v)溶液，放置過夜，以去離子水將附著之硝酸沖洗乾淨，乾燥備用。
2.4試劑之調製：
2.4.1 50%醋酸溶液：取冰醋酸50 mL，加去離子水使成100 mL。
2.4.2 含0.2 M過氧化氫之1% (w/w)硝酸溶液：取過氧化氫(註) 20.4 mL，加入去離子水500 mL，混合均勻，緩緩加入硝酸(超純級) 10 mL，再加去離子水使成1000 mL，臨用時配製。
註：過氧化氫使用後，應立即冷藏保存，以避免降解。
2.5移動相溶液之調製：
2.5.1移動相溶液A：
稱取碳酸銨19.2 g，以去離子水800 mL溶解，加入甲醇30 mL，以50%醋酸溶液調整pH值至8.5，加去離子水使成1000 mL，經濾膜過濾，取濾液供作移動相溶液A。
2.5.2移動相溶液B：
取移動相溶液A 2.5 mL，加入甲醇30 mL，混合均勻，加去離子水使成1000 mL，經濾膜過濾，取濾液供作移動相溶液B。
2.6標準溶液之配製：
精確量取三價砷對照用標準品1 mL，以含0.2 M過氧化氫之1% (w/w)硝酸溶液定容至100 mL，作為標準原液，冷藏儲存。臨用時取適量標準原液，以含0.2 M過氧化氫之1% (w/w)硝酸溶液配製為0～25 ng/mL，供作標準溶液。
2.7檢液之調製：
將檢體粉碎、細切均質或混勻後，取約1 g，精確稱定，置於離心管中，加入含0.2 M過氧化氫之1% (w/w)硝酸溶液20 mL，旋渦混合，於80℃水浴中超音波振盪30分鐘，冷卻後，以3000 ×g離心10分鐘，收集上清液，殘渣再加入含0.2 M過氧化氫之1% (w/w)硝酸溶液20 mL，重複上述步驟萃取一次，合併上清液，以含0.2 M過氧化氫之1% (w/w)硝酸溶液定容至50 mL，經濾膜過濾，供作檢液(註)。另取一空白離心管，加入含0.2 M過氧化氫之1% (w/w)硝酸溶液10 mL，以下步驟同檢液之操作，供作空白檢液。
註：檢液中若有殘餘油脂，可加入正己烷1 mL混合均勻，靜置分層，取下層液進行層析。
2.8鑑別試驗及含量測定：
精確量取檢液、空白檢液及標準溶液各20 μL，分別注入液相層析感應耦合電漿質譜儀中，依下列條件進行分析。就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間比較鑑別之，並依下列計算式求出檢體中無機砷之含量(mg/kg)：
(公式見全文檔)
C：由標準曲線求得檢液中五價砷之濃度(ng/mL)
C0：由標準曲線求得空白檢液中五價砷之濃度(ng/mL)
V：檢體最後定容之體積(mL)
M：取樣分析檢體之重量(g)
註：無機砷包括三價砷及五價砷，本檢驗方法係將檢體中三價砷氧化成五價砷，故檢體中無機砷含量以五價砷計。
液相層析感應耦合電漿質譜分析測定條件(註)：
層析管：PRP-X 100，5 μm，內徑4.6 mm × 15 cm。
層析管溫度：25℃。
移動相流速：1 mL/min。
移動相溶液：A液與B液以下列條件進行梯度分析
時間 A(%) B(%)
0 → 2 0 → 0 100 →100
2 → 3 0 → 50 100 →50
3 → 8 50 → 50 50 →50
8 → 9 50 → 100 50 →100
9 → 12 100 → 100 0 →100
12 → 13 100 → 0 0→100
13 → 15 0 → 0 100 →100
電漿無線電頻功率：1550 W。
電漿氬氣流速：15 L/min。
輔助氬氣流速：0.9 L/min。
偵測模式：氣體去除干擾模式。
偵測離子(m/z)：砷，75。
註：1. 所採用之液相層析條件應有效將無機砷與有機砷分離。
2. 上述測定條件分析不適時，依所使用之儀器，設定適合之測定條件。
附註：
1.本檢驗方法之定量極限為0.02 mg/kg。
2.檢體中有影響檢驗結果之物質時，應自行探討。